本技术融合RPA与CRISPR/Cas12b系统，建立布鲁氏菌核酸快速检测方法。具备高灵敏、高特异优势，30分钟等温完成检测，支持荧光与试纸条双模式读取，适用于现场快检与实验室诊断，为布病防控提供高效工具。
布鲁氏菌病（简称“布病”）是由布鲁氏菌引起的一种严重危害畜牧业发展和人类健康的人畜共患传染病。该病不仅会导致家畜（如牛、羊）发生流产、不孕和睾丸炎，造成巨大的经济损失，还能通过接触或饮食传播给人类，引发长期发热、多汗和关节疼痛，严重威胁公共卫生安全。因此，建立快速、准确的诊断技术是防控布病传播的关键。
● 常规分子生物学检测（如PCR/qPCR）：虽然灵敏度高，但依赖昂贵的精密仪器（热循环仪）和专业的实验室环境，对操作人员技术要求高，难以在基层兽医站、养殖场或口岸现场进行即时检测（POCT）。
针对上述痛点，本技术基于重组酶聚合酶扩增（RPA）与CRISPR/Cas12b系统的深度融合，开发了一种新型核酸检测方法。该技术利用RPA的等温扩增能力摆脱了对热循环仪器的依赖，结合CRISPR/Cas12b系统的“反式切割”活性实现超高特异性识别。这种“一步法”检测方案不仅将检测时间缩短至30分钟，更实现了高灵敏度与高特异性的统一，有效解决了传统方法“慢、繁、险”的难题，为布鲁氏菌病的现场快速筛查和精准防控提供了强有力的技术支撑。
💡 核心思路： 本技术基于重组酶聚合酶扩增（RPA）与CRISPR/Cas12b系统相结合，建立了一种高灵敏度、高特异性的布鲁氏菌核酸快速检测方法。该方法可在等温条件下完成扩增与检测，无需复杂仪器，30分钟内即可完成检测，适用于现场快速筛查与实验室精准诊断。
【】 实验室阶段 【】 小试阶段 【】 中试阶段 【√】 可规模应用
适用于多种场景：其特性使其非常适合基层兽医站、养殖场、口岸检疫、疾控中心的现场快速检测（POCT）和实验室精准诊断。技术可扩展性强：该技术平台已验证成功，可为其他病原体的快速检测开发提供技术模型和基础。
宏观市场规模：数十亿美元的全球蓝海稳步扩容 布鲁氏菌病作为全球范围内流行的人畜共患病，其检测需求随着畜牧业发展和公共卫生意识的提升而持续高涨。权威市场调研数据显示，2024年全球布鲁氏菌病检测试剂市场规模已达8亿美元，并预计将以约5.9%的年均复合增长率（CAGR）稳步攀升，到2035年市场规模将突破15亿美元。 在“一带一路”沿线及亚太、非洲等发展中经济体，由于畜产品贸易活跃且防控体系尚不完善，对快速、低成本诊断解决方案的需求尤为迫切。本技术摆脱了对昂贵PCR仪器的依赖，极大降低了单次检测的硬件门槛，完美契合了全球基层防疫与现场筛查的巨大市场缺口。 极致降本增效：单例检测成本断崖式下降 传统的布鲁氏菌分子诊断（如qPCR）不仅设备昂贵，单例检测成本也普遍偏高（通常在85美元/例左右）。而本技术采用的RPA等温扩增与CRISPR可视化读取方案，大幅削减了设备折旧与试剂耗材成本。 参考同类CRISPR快速诊断技术的商业化数据，应用该平台可将单例检测成本直降至8美元/例左右，降幅高达90%。对于存栏量巨大的规模化养殖场或高频次筛查的口岸检疫部门而言，这种极致的成本控制能力意味着每年可节省数百万元甚至上千万元的防疫开支，具备极强的商业付费吸引力。 产业减损价值：筑牢百亿级畜牧经济安全防线 布鲁氏菌病对畜牧业的打击是毁灭性的，不仅导致牲畜流产、产奶量骤降，更会引发大规模的扑杀与贸易禁运。以中国为例，通过早期精准筛查与防控，该技术每年有望帮助畜牧产业避免约12亿元的直接经济损失。 该技术30分钟内即可出结果，且灵敏度可达10拷贝/测试（与金标准qPCR相当），能够在感染极早期迅速锁定传染源。这种“早发现、早处置”的能力，能有效阻断疫情在畜群中的扩散，保障肉奶供应链的安全与稳定，其背后蕴含的产业保护价值远超检测试剂本身的市场规模。 政策与技术双轮驱动：抢占POCT赛道制高点 随着国家对生物安全与食品安全监管力度的不断加强，基层兽医站、养殖场及疾控中心对合规、高效的现场快检工具需求激增。目前，市场上的主流玩家多为IDEXX、硕腾（Zoetis）等国际巨头，国内在基层POCT分子诊断领域仍存在巨大的国产化替代空间。 本技术已具备“一步法”闭管检测、常温稳定储存等成熟工艺特征，且技术平台具备极强的可扩展性（可快速迁移至其他病原体检测）。在后续的新兽药申报与医疗器械注册推进下，该技术有望迅速填补国内基层布病快检的市场空白，成为公共卫生应急与动物疫病防控领域的标杆性产品。
（1）精准高效 高灵敏度：检测灵敏度可达1pg/μL（约10拷贝/测试），与传统的qPCR方法相当，能够极早期地发现感染。 高特异性：基于CRISPR/Cas12b的精准识别，与牛结核、牛病毒性腹泻病毒、绵羊痘病毒等相近病原体无交叉反应，结果准确可靠。 高符合率：与金标准qPCR方法对临床样本的检测符合率达到100%，阳性检出率一致。
（2）快速便捷 反应快速：整个检测过程仅需30分钟，远快于需要数小时的传统PCR方法。 一步法操作：创新性地将RPA扩增与CRISPR检测整合在单一反应体系中，无需开盖，避免了气溶胶污染，简化了操作步骤。 闭管检测：减少了样本间交叉污染的风险，提升检测安全性。
（3）简单稳定 等温检测：全过程在恒温（~37-42°C）下进行，无需复杂的升降温仪器（如PCR仪），对设备和实验环境要求极低。 体系稳定：采用的Cas12b酶能耐受更宽的温度和pH范围，使试剂更易于储存和运输，性能更稳定。
（4）灵活直观
多平台输出：可根据应用场景选择配套的检测方式：
①荧光读数平台：适合需要定量或更高通量的场景，结果由设备客观判读。
②试纸条可视化平台：适合现场快速筛查，结果肉眼可见（T线/C线），无需任何仪器。
适用于复杂样本：配套的快速核酸提取方法可处理多种样本类型（如组织、血液等）。
该项成果可采用以下方式转化合作：
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